最近在做knockout,會想... 到底為何而做?

這類相關的研究在pubmed上打上關鍵字都啪啦一堆可以看,那幹嘛還要knockout
這gene? 

在抽plasmid. enzyme digestion. gel extraction. 到ligation看起來好像. 似乎都ok! 可
是到了transformation就卡住了。今天一早到實驗室還沒坐下來享用早餐就迫不及待
去看看incubator中的plate有什麼成果,嗚嗚... positive. negative control都正常,但
是我的ligation好像就沒有長。冏

湯姆認為是可能是S2-TA cloning的關係導致transformation效果不好,雖然我不懂他
的邏輯為何?(好吧! 我覺得是完全沒邏輯道理可言)但是還是願意採信他所說的,先用
PCR將S2夾出來後,將enzyme inactivation後再與vector進行ligation。另一點,茄子
認為在positvie control中所看的菌株數與正常一般的情況比起來是少了許多,懷疑前
一步驟在做的competent cells可能不是太好造成,所以可以同時拿茄子的CC一起做
個對照。

只是PCR的primer,翻呀翻找呀找的,實驗室並沒有完整集中建檔,所以只能找之前
助理的盒子中是否有我要的primer,應該要建議湯姆把這些東西建檔,否則未來五年
十年仍然會設計大量的primer出來,只會搞得一團亂,那叫老師學生們情何以堪? 想
把過去的一些研究再重新做過confirm都會變得很麻煩。

還原當初他們的PCR process的真相也是需要花上一點功夫。而且太久沒做這些cloning
的分生實驗,手感都變得非常生疏。還是快快上手吧!

如果transformation成功,就在進行另一階段的clone- 把S1接進去,這樣knockout才能
告一段落。不過回到最開始的問題,這 knockout 完能幹嘛?!  想不透... 我還是祈禱下周
microarray data快點下來,那才是另一個比較重要的故事開始。

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